自裂解肽是简便高效生产单克隆抗体的关键

A*STAR研究人员利用自切割肽设计了一种提高单克隆抗体生产效率的载体，为改进临床前研究提供了潜力。

单克隆的生产抗体（例如免疫球蛋白G，涉及连接大型和小多肽抗体亚基和轻链基因。“平衡重链和轻链表达的比例对于高水平和质量抗体表达至关重要，”余冬阳从A *星级生物处理技术研究所解释。

用于制备抗体的当前工业方法，其中轻链，重链和选择标记基因在单独的载体或单载体上递送具有多个启动子的单个载体，不能准确地平衡光和重链基因表达。这往往会导致许多非表达细胞。

使用通常衍生自病毒的2A肽如2A肽的蛋白质，表达基因似乎是由工业青睐的质粒载体的有希望的替代品，“2A肽通过表达它们以相等的量能够同时表达多基因一个开放阅读框架，“杨解释道。但是，虽然2A肽可以产生抗体，但是2a的不完全裂解可导致形成不正确折叠并形成高分子聚集体的不正确抗体。

认识到这些品种在单克隆抗体生产方面的潜力，Yang和他的团队寻找了具有更高切割效率的2A肽，然后开发了纯化方法来去除不完全切割2A肽时不正确的抗体种类。

研究人员比较了四种用于表达三种生物相似的免疫球蛋白g1的2A肽，其中包括甘氨酸-丝氨酸-甘氨酸连接物的存在和不存在单克隆抗体在中国仓鼠卵巢细胞系中进行了短暂和稳定的转染。

他们发现包含甘氨酸 - 丝氨酸 - 甘氨酸接头的含量显着提高了每个2A肽的切割效率和单克隆抗体表达水平。T2A，衍生自甲基胺 - 甘氨酸病毒的2A肽，具有最高的切割效率，并且与Furin（Furin-GSG-T2A）组合时对IgG抗体表达最有效。

虽然更有效，2A肽与甘氨酸-丝氨酸-甘氨酸的连接还存在一定程度的不完全性裂解，导致不正确的抗体。该团队试图用他们之前开发的一种净化方法来补救，即染色质导向澄清。杨说:“我们期望在高分子聚集物中去除不正确的物种。”“然而，令人惊讶的是，IgG单体中含有的错误物种被移除，因为正确的抗体与正确的抗体之间只有很少的氨基酸差异。”

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